分段盐析

编辑:品味网互动百科 时间:2019-12-11 20:10:04
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盐析是指向蛋白质溶液中加入高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体稳定性,使蛋白质的溶解度降低而从溶液中沉淀析出的过程。改变盐的浓度与溶液的PH值,便可将混合液中的蛋白质逐个盐析分开,这种分离蛋白质的操作称为分段盐析。[1]  如:血清球蛋白(50%(NH4)2SO4饱和度),清蛋白(饱和(NH4)2SO4)。
中文名
分段盐析
方    法
分段盐析的条件先
方法2
 每一段盐析静置
方法3
比如实验中的活性物质

分段盐析盐析方法

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对分离目的蛋白的盐析,最好采用分段盐析。由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同,沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同,改变盐的浓度与溶液的pH值,可将混合液中的蛋白质分批盐析分开,这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout)。如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白,饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白在内的全部蛋白质。

分段盐析原理

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蛋白质是亲水胶体,借水化膜和同性电荷(在PH值7.0的溶液中一般蛋白质带负电荷〉维持胶体的稳定性。向蚩白质溶液中加入某种碱金属或碱土金厉的中性盐类,则发生电荷中和现象(失去电荷)。当盐类的浓度足够大时,蛋白质胶粒脱水而沉淀,称为盐析。由盐析所得的顼沉淀,经过透析或用水稀释以减低或除去盐后,能再溶解并恢2其分子原有结构及生物活性,因此由盐析生成的沉淀是可逆性沉淀。各种蛋白质分子颗粒大小、亲水 度不同,故盐析所需耍的盐浓度也不一样。调节混合蛋白质溶液中盐的浓度.可使各种 质分段沉淀。球蛋白在个饱和硫酸铵溶液中即可析出,白蛋白则需在饱和硫酸钹溶液中才能沉淀,此法是蚩白质分离纯化过程中的常用方法。
蛋白质的分子很大,其颗粒在胶体颗粒范围(直径1~100nm)内,所以不能透过半透膜。选 孔径合宜的卞透股,由于小分子物质能够透过,而蚩白质颗粒不能透过,因此可使蛋白质和小分于物质分开。这种方法可除去和 白质混合的中性盐及其他小分子物质。这种技术叫做透析,是常川来纯化蛋白质的方法。由盐析所得的蛋白质沉淀,经过透析脱盐后仍可恢复其故有结构及生物活性。[2] 

分段盐析操作步骤

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1. 分段盐析的条件先需要进行小实验探索,如:先进行0%-30%的硫酸铵沉淀,再进行30%-60%的硫酸铵沉淀,最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀。
2. 每一段盐析静置之后都将离心取沉淀,透析并检测活性。通过实验结果可以看出哪一段盐析出来的目的产物最多,相对来说杂质就更少。
3. 比如实验中的活性物质主要在60%-80%这段出来,在以后的实验中,就可以首先进行0%-60%的硫酸铵沉淀,这段沉淀物可以抛弃(去处大多数杂质);然后进行60%-80%的硫酸铵沉淀,这段沉淀出来是物质是所需要的目的物质含量比较高的物质,将其收集进行下一步纯化工作 。
参考资料
  • 1.    任莉莉.护士继续教育手册:河南科学技术出版社,1999年01月第1版:第223页
  • 2.    川北医学院生物化学教研室.生物化学技术与实验:川北医学院,2006.08:第41页
词条标签:
生物 理学